List of Assays
Zellfreie Assays
Methodologie
Absorption = Abs, Fluoreszenz = FI, Fluoreszenzpolarisation = FP, Zeitaufgelöste Fluororeszenz = TRF, Fluoreszenzresonanzenergietransfer = FRET
Verwendungszweck: Bestimmung der kinetischen Parameter wie Km, Vmax, usw.; IC50; Screening mit niedrigem, mittlerem und hohem Durchsatz
Assay
Enzymatische Analysen
Enzymatische Essays für:
Kinases (PKC alpha)
TRF
Proteases (HIV1 Protease, Cathepsin B)
FRET, IQF
Kleine G-Proteine; Beispiele: Protein Gq, Rac
FP
ELISA
Phosphodieasterasen (PDE V) Phosphodieasterasen (PDE V)
FP
Verwendungszweck: Liganden-, Agonisten und Antagonistenbindung: IC50-Bestimmung für Inhibitoren
Metabolische Enzyme
Abs
ECM (Collagenase, Transglutaminase)
G-protein
FP
Adenylatzyklase
FAAH
FI
FI
Biliverdinreduktase
FP
Östrogenrezeptoren
FP, TRF
Trimerische G-Proteine
Rezeptoren
Rezeptoraktivitäten
hCGbeta, hFc, MCP1, Insulin
Collagen
HRP
FP
Immunassays
Verwendungszweck: Entwicklung von Assays für die Interaktionen zwischen Proteinen, Probenvorbereitung, Antikörpercharakterisierung
RIPA
Zellextraktionen
Proteindetektion
SDS-PAGE, WB
Proteomics
Proteinquantifizierung
Bradford, Lawry, BCA
FRET-TRF
ELISA
Beispiel II
Beispiel I
Protein-Protein-Interaktionen
Phosphorylierung und Dephosphorylierung in vitro
Entsprechend dem ausgewählten Assay
ELISA, W.B.
Antigendetektion in Proben
Ligandenproteininteraktion
Inhibition in Bindungs-Assays
Wettbewerbsbasierte Bindungsassays
Bindungs-Assays
IP&W.B., FRET, HTRF, alpha screen, FP
IP&W.B., FRET, HTRF, alpha screen, FP
FRET, HTRF, FP
ELISA, W.B., FACS, IP
Detektion von zytoplasmischen, nuklearen, Membran- und Zytoskelettproteinen
Fluorophor-Markierung von Proteinen und Peptiden
Fluoreszein, Biotin
Alexa-fluor
Aufreinigung der Markierungspeptide durch Auftragsforschungsunternehmen
Aufreinigung von Markierungsproteinen in PD10
Western Blotting
Probenvorbereitung für Western Blotting
Probenvorbereitung für quantitatives Western Blotting
Tricin-SDS-Gels
​Elektrophoretische Trennung
​Elektrophoretische Trennung für Quantitatives Western Blotting
Transfer: iBlot, trocken/halbtrocken/Nasstransfer
Quantitatives Western Blotting
Entwicklung von Western Blots mittels chromogener ECL-Methoden
Entwicklung von Western Blots mit wissenschaftlichem Bildgebungsfilm
Abs, Fl, FP, TRF und andere...
FP
Chemiluminescence
Proteomic profiling
Visualisierung von Western Blots auf Kodak Image Station Bildgebungsfilm
Compound Characterization
Solubility
Fluorescence Spectroscopy
Abs
3D FI
3D FI
Protein - Peptide/Nucleic acids/Small molecule Interaction
FP, ELISA
FP
Nucleic acids quantification
Biophysical assays
Thermal shift
Protein-small molecule
Other
In-vitro transcription/translation
FRET in confocal microscopy
Zellbasierte Assays
Zellbanklagerung möglich
Züchten, Einfrieren, Auftauen und Verpacken unterschiedlicher Zelllinien
Zellextraktionen und Proteindetektion:
Vorbereitung von Proteinganzzellextrakten für die quantitative Gelanalyse
Siehe: Zellfreie Assays
P2-Einrichtungen ermöglichen verschiedene Zellkulturaktivitäten
Gewebekultivierungsmethoden
Gewebekultivierungsmethoden
Züchten und Lagern von Zellen
Gewebekultur
Methodologie
Assay
Potenz-Assays
Proliferation/Aktivierung/Apoptose
Beispiel: Proliferation von Lymphknotenzellen
BRDU
Toxizitäts-Assays
Zellviabilität, Zytotoxizität, verankerungsabhängiger Zelltod und Zellseneszenz
Angiogenese-Assay
Verwendung von ECM-Matrixgel
WST1, MTT, XTT, Annexin CY3, Zelltiterglo
Autophagie - ein lysosomaler Abbaumechanismus für zytoplasmisches Material, wird bei Zellstress aktiviert
Zelladhäsion und -anbindung
Beispiel: Fibroblasten-Anbindungs-Assay
Cell Biolabs kits
Zwei Formen von LC3 können vom Western Blot erkannt werden
Zellmigration: Chemotaxis, Haptotaxis, Transmigration, Wundheilung
Beispiel: Transwell mit mcp1 als chemischem Lockstoff
Matrigel, Transwell + WST1
MTT, XTT, WST1, WST3, IL2 (T Zellen)
Cell Biolabs kits
CytoSelect™ ECM Zelladhäsions-Assays (Cell Biolabs)
Glukoseaufnahme in 3T3-L1
Induktion der Zelldifferenzierung (z.B. L1 Prä- Adipozyten bis differenzierte Adipozyten
Induktionsmethoden
Interleukine, TNF, Wachstumsfaktoren…
Zellaktivierung und -proliferation
Folatrezeptorbindung in KB-Zellen
Proliferation mit rekombinanten Humanproteinen behandelter Fibroblasten (CRL2522) und Endothelzellen
Tgase-Aktivität
Zellaktivierung gemessen durch Ca++ Zustrom
Ektopische Proteinexpression in Bakterien- und Säugetierzelllinien
Zellzyklusvon Zelloberflächenrezeptoren und Antigenen
Erkennung von Zelloberflächenrezeptoren und Antigenen
Trimeres G-Protein über forskolininduziertes cAMP
FACS, ELISA
Propidiumjodid (PI) rot in FACS
Transfektionen, Transformationen
ELISA
Zellsignalisierung
Bindungs-Assays
Säugetier-Zwei-Hybrid
IP-WB, ELISA
Protein-Protein-Interaktion
Cell Biolabs kits
Gene expression/quantification
mRNA, RNA, miRNA, siRNA, DNA and RNA-Plex
Immunological assays
Isolation of PBMCs from whole blood
Gravity Sedimentation
Magnetic separation
T Cell enrichment
T Cell Activation/Expansion
CD3+CD28 antibodies
Inflamation assays
Andere
Confocal microscopy
Lenti-viral particles
Spezielle Antikörper
Verwendungszweck: Liganden-, Agonisten und Antagonistenbindung: IC50-Bestimmung für Inhibitoren.
Insulin, Calcitonin
Bioassays
Specific Assays
Assay / Aktivität
Methodology
Methodology
Detektion von Peptiden in Serum
Absorption nach HRP
Detektion von Antikörpern in Serum
Menschliches Fc aus aufbereitetem Medium
HRP
ELISA-HRP
Cytokines
Detektion von Zytokinen in Serum
Spezielle Proteine
Durchdringung der Blut-Hirn-Schranke
Extraktion von Evans Blau/ Fluoreszein und markierten Proteinen aus Rattenhirn
Fluoreszenz/Absorption
Insulin, Calcitonin
Early in vitro ADMETox
Assay
Methodology
Absorbtion
Intestinal absorbtion
Caco2 cells
Absorption
Intestinal absorption
Caco2 cells
Distribution
Binding to plasma proteins
FP
Metabolism
Metabolic Stability
Microsomes, Hepatocytes
Microsomes
Esterases metabolism
Recombinant CYP450 isozymes
CYP-Inhibition
CYP-Induction
mRNA
Toxicity
Cytotoxicity
WST1-viability assay
Cardiotoxicity
Binding assay-FP